蛋白質(zhì)和氨基酸是生物體的重要組成部分，它們?cè)趧?dòng)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝和生理功能中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在動(dòng)植物理化檢測(cè)中，蛋白質(zhì)及氨基酸的檢測(cè)具有以下幾個(gè)方面的價(jià)值：
營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)估
蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是構(gòu)成生物體細(xì)胞組織的重要成分。通過(guò)檢測(cè)植物各部分中蛋白質(zhì)的含量，可以評(píng)估其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，這對(duì)于食品和飼料的質(zhì)量控制尤為重要。
品種改良和育種
蛋白質(zhì)含量的測(cè)定可以幫助農(nóng)業(yè)生產(chǎn)者選擇優(yōu)良品種，進(jìn)行品種改良和育種工作。不同作物的蛋白質(zhì)含量水平不同，通過(guò)檢測(cè)可以篩選出具有高蛋白質(zhì)含量的品種，從而提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。
生長(zhǎng)條件優(yōu)化
植物在不同的生長(zhǎng)階段對(duì)氮的吸收和利用不同，蛋白質(zhì)的含量也隨之變化。通過(guò)檢測(cè)可以了解植物對(duì)氮的需求量，從而優(yōu)化肥料使用和灌溉條件，提高作物的生長(zhǎng)效率。
食品加工和質(zhì)量控制
在食品加工過(guò)程中，蛋白質(zhì)的含量和質(zhì)量直接影響產(chǎn)品的口感、色澤和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。通過(guò)檢測(cè)可以確保食品加工過(guò)程中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，保證產(chǎn)品質(zhì)量。
疾病診斷和預(yù)防
蛋白質(zhì)和氨基酸的異常變化往往與某些疾病的發(fā)生有關(guān)。通過(guò)檢測(cè)可以早期發(fā)現(xiàn)潛在的健康問(wèn)題，為疾病的診斷和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。
檢測(cè)指標(biāo)
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指標(biāo)
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方法
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標(biāo)準(zhǔn)
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樣品
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用量/g
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蛋
白
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可溶性蛋白
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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鮮樣/烘干樣
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0.4
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粗蛋白
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元素分析儀法
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蔡紅燕.利用元素分析儀測(cè)定面粉中粗蛋白方法的研究
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烘干樣
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0.4
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貯藏蛋白（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白）
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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田紀(jì)春《谷物品質(zhì)測(cè)試?yán)碚撆c方法》
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烘干樣
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2
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清蛋白（單測(cè)）
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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田紀(jì)春《谷物品質(zhì)測(cè)試?yán)碚撆c方法》
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烘干樣
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2
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球蛋白（單測(cè)）
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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田紀(jì)春《谷物品質(zhì)測(cè)試?yán)碚撆c方法》
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烘干樣
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2
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醇溶蛋白（單測(cè)）
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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田紀(jì)春《谷物品質(zhì)測(cè)試?yán)碚撆c方法》
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烘干樣
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2
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谷蛋白（單測(cè)）
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考馬斯亮藍(lán)比色法
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田紀(jì)春《谷物品質(zhì)測(cè)試?yán)碚撆c方法》
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烘干樣
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2
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氨
基
酸
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脯氨酸
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茚三酮比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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鮮樣/烘干樣
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0.4
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游離氨基酸總量
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茚三酮比色法
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李合生《植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)》
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鮮樣/烘干樣
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0.4
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水解氨基酸組分
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高效液相色譜法
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付迪,沈艷紅,宛燕飛,張力,徐志珍,張文清,夏瑋.OPA-FMOC在線柱前衍生化HPLC法測(cè)定甘露聚糖肽中氨基酸組成及含量
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鮮樣/烘干樣
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0.5
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液質(zhì)聯(lián)用
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趙文琦,夏菲,第五文博等.5種高山蔬菜的氨基酸含量分析及營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)
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鮮樣/烘干樣
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0.5
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游離氨基酸組分
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高效液相色譜法
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衛(wèi)陽(yáng)飛,宋海,岳國(guó)仁,張宏曦,李彩霞.6種葡萄籽中水解氨基酸和游離氨基酸含量測(cè)定及比較[J].食品與機(jī)械,2018,34(09):77-82.
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鮮樣/烘干樣
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0.5
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液質(zhì)聯(lián)用
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趙文琦,夏菲,第五文博等.5種高山蔬菜的氨基酸含量分析及營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)
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鮮樣/烘干樣
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0.5
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γ-氨基丁酸
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高效液相色譜法
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NY/T 2890-2016 稻米中γ-氨基丁酸的測(cè)定 高效液相色譜法
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鮮樣/烘干樣
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0.5
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瓜氨酸
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比色法
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馬燕萍，賴逸云，應(yīng)泉盛，方春英，鄭佳雯，朱祝軍，何勇.
不同砧木嫁接對(duì)西瓜果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及瓜氨酸代謝的影響
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鮮樣
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20
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高效液相色譜法
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劉文,陳文秋,潘健等.天花粉中瓜氨酸與γ-氨基丁酸的含量測(cè)定
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鮮樣
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5
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麥角硫因
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高效液相色譜法
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12株側(cè)耳屬食用菌菌絲中主要營(yíng)養(yǎng)成分分析
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鮮樣/烘干樣
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2
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樣品采集
1. 樣品類型
植物樣品：可以是葉片、種子、果實(shí)、根系等不同部位，具體取決于檢測(cè)目的。
動(dòng)物樣品：包括肌肉組織（肉類）、血液、乳制品、蛋類等，同樣根據(jù)檢測(cè)需求選擇。
2. 采樣工具與容器
使用干凈、無(wú)菌的采樣工具，如一次性手套、剪刀、鑷子等，避免污染。
樣品應(yīng)放入預(yù)先標(biāo)記好的無(wú)菌容器中，如自封袋、離心管或玻璃瓶。容器需干燥、清潔，最好為一次性使用，以減少交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。
3. 樣品處理
快速冷凍：對(duì)于需要保持蛋白質(zhì)活性或減少降解的樣品，采集后應(yīng)立即放入液氮或干冰中快速冷凍，然后轉(zhuǎn)移至-80°C冰箱長(zhǎng)期保存。
防腐劑添加：某些情況下，可向樣品中加入少量防腐劑，如甲醛溶液（注意使用安全），但需謹(jǐn)慎使用，因?yàn)檫@可能影響后續(xù)的分析結(jié)果。
干燥保存：對(duì)于一些穩(wěn)定性較高的樣品，可以通過(guò)自然風(fēng)干或使用干燥器進(jìn)行干燥，然后密封保存。
4. 樣品量
確保采集足夠量的樣品，一般建議至少5克以上，以便進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)或后續(xù)的實(shí)驗(yàn)需求。
5. 樣品標(biāo)識(shí)
每個(gè)樣品都應(yīng)有清晰的標(biāo)識(shí)，包括樣品名稱、采集日期、采集地點(diǎn)、采集人等信息，以便于追溯和管理。
6. 安全與倫理
在采集動(dòng)物樣品時(shí)，應(yīng)遵循動(dòng)物福利原則，確保操作過(guò)程中動(dòng)物不受不必要的痛苦。
對(duì)于含有潛在病原體的樣品，如某些動(dòng)物組織，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩雷o(hù)措施，遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)定。
7. 快速送檢
盡快將樣品送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，尤其是對(duì)于需要保持新鮮度的樣品，避免長(zhǎng)時(shí)間存放導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或氨基酸降解。
如何避免樣品在儲(chǔ)存過(guò)程中發(fā)生蛋白質(zhì)變性或氨基酸降解
控制溫度：低溫條件下，蛋白質(zhì)降解的速率降低，可以有效避免蛋白質(zhì)發(fā)生變性。在-80℃甚至更低的溫度下，蛋白質(zhì)的保存時(shí)間更久。
選擇合適的保存溶液：蛋白質(zhì)保存的溶液應(yīng)該不與蛋白質(zhì)發(fā)生作用，以保證蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)完整性。常用的保護(hù)劑包括甘油或DMSO（二甲基亞砜）。
避免化學(xué)和物理因素的影響：避免使用能夠引起蛋白質(zhì)變性的化學(xué)試劑，如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬鹽、尿素、乙醇、丙酮等。同時(shí)，避免加熱、紫外線照射、超聲波、劇烈振蕩或攪拌等物理因素的影響。
使用凍干技術(shù)：對(duì)于難以在低溫下穩(wěn)定保存的蛋白質(zhì)，可以采用凍干技術(shù)，將蛋白質(zhì)樣品轉(zhuǎn)化為固態(tài)，減少水分含量，延長(zhǎng)保存時(shí)間。
樣品前處理
1. 樣品破碎/勻漿
植物樣品：使用研磨器或勻漿機(jī)將樣品磨碎成粉末或漿狀，有時(shí)會(huì)加入石英砂或玻璃珠以助于細(xì)胞壁的破碎。
動(dòng)物樣品：肌肉組織等硬質(zhì)樣品可以先冷凍硬化再切碎，隨后在液氮下進(jìn)一步研磨；血液或細(xì)胞懸液可以直接進(jìn)行勻漿。
2. 蛋白質(zhì)提取
提取緩沖液：選擇適合的緩沖液，如磷酸鹽緩沖液（PBS）、Tris-HCl緩沖液等，根據(jù)樣品類型調(diào)整pH值和離子強(qiáng)度，以保證蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和溶解性。
抑制劑添加：為了防止蛋白酶的活性，通常會(huì)在提取緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，如PMSF（苯甲基磺酰氟）或EDTA。
提取過(guò)程：將樣品與提取緩沖液混合，通過(guò)振蕩、超聲波等方式加速蛋白質(zhì)的溶解，必要時(shí)可通過(guò)離心去除不溶性顆粒。
3. 蛋白質(zhì)定量
在進(jìn)行進(jìn)一步的分析之前，通常需要進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，以確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性和一致性。常用的蛋白質(zhì)定量方法有BCA法、Bradford法等。
4. 蛋白質(zhì)消化
酶解：對(duì)于蛋白質(zhì)檢測(cè)，常使用胰蛋白酶等蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小肽段，便于后續(xù)的質(zhì)譜分析。
還原與烷基化：在某些情況下，需要先通過(guò)β-巰基乙醇等試劑還原二硫鍵，再用碘乙酰胺等試劑進(jìn)行烷基化，以保護(hù)半胱氨酸殘基。
5. 氨基酸衍生化
對(duì)于氨基酸檢測(cè)，樣品中的游離氨基酸或消化后的肽段需經(jīng)過(guò)衍生化處理，使其熒光或吸收性質(zhì)改變，以提高檢測(cè)的靈敏度。
6. 樣品凈化與濃縮
使用固相萃?。?/span>SPE）、凝膠過(guò)濾色譜（GFC）等技術(shù)去除樣品中的雜質(zhì)，通過(guò)真空濃縮或冷凍干燥等方式濃縮樣品，提高待測(cè)組分的濃度。
7. 樣品儲(chǔ)存
處理完成的樣品應(yīng)根據(jù)后續(xù)檢測(cè)的要求，在適當(dāng)?shù)臈l件下儲(chǔ)存，如-80°C冰箱，以保持樣品的穩(wěn)定性。
在進(jìn)行蛋白質(zhì)和氨基酸的樣品前處理時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：
·確保使用的試劑和溶劑純凈，以避免引入額外的雜質(zhì)。
·在處理過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間，以免影響蛋白質(zhì)或氨基酸的穩(wěn)定性。
·對(duì)于特定的氨基酸，如色氨酸，可能需要采用堿水解，而不是酸性水解，以避免破壞。
·在進(jìn)行氨基酸的衍生化處理時(shí)，要選擇合適的衍生化試劑，并注意反應(yīng)條件，以確保反應(yīng)的完全性和產(chǎn)物的穩(wěn)定性。
點(diǎn)擊進(jìn)入【學(xué)院】查看動(dòng)/植物樣品的采集制備與保存運(yùn)輸。
樣本要求
采集的樣品，均應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行分析檢測(cè)，如不能及時(shí)分析檢測(cè)的則需要進(jìn)行處理和保存，一般應(yīng)遵循的原則是：環(huán)境干燥、溫度較低、避免光照、密封保存。
鮮樣：取樣后立即放入用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管（提前進(jìn)行編號(hào)）并放入液氮速凍，-80℃超低溫冰箱保存，足量干冰郵寄運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
烘干樣：取樣后用柔軟濕布擦凈，不應(yīng)用水沖洗。盡快晾干并將樣品置于105?℃的烘箱中烘?15min以終止樣品中酶的活動(dòng)。經(jīng)過(guò)殺青之后，應(yīng)立即降低烘箱的溫度，維持在70?～80℃，直到烘至恒重。若測(cè)定樣品中金屬元素的含量，應(yīng)注意金屬器械的污染問(wèn)題，以防干擾。
漢廣提供“一站式”檢測(cè)服務(wù)，您只需要提供樣本原樣，漢廣會(huì)嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)或行標(biāo)，進(jìn)行樣本前處理、指標(biāo)檢測(cè)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、報(bào)告編寫等工作，減少科研工作者的工作量。
取樣前，請(qǐng)與業(yè)務(wù)經(jīng)理溝通您的檢測(cè)需求，確認(rèn)樣品類型以及寄樣方式，以免影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)性，造成時(shí)間及成本的損失！
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